薄膜過濾器的使用需遵循無菌操作規(guī)范，核心步驟包括實驗準(zhǔn)備、樣品過濾、沖洗、培養(yǎng)及結(jié)果觀察，關(guān)鍵在于防止污染并確保濾膜完整性?。

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一、實驗前準(zhǔn)備（嚴(yán)格防污染）
環(huán)境與人員?：操作需在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，環(huán)境潔凈度應(yīng)達(dá)百級標(biāo)準(zhǔn)。操作者穿戴無菌手套、口罩及實驗服。
耗材滅菌?：
使用孔徑為 ?0.45μm（細(xì)菌）或 0.22μm（真菌）? 的無菌濾膜（直徑通常為47–50mm）。
濾杯、收集瓶、鑷子等金屬/玻璃部件需濕熱滅菌或火焰消毒 。
沖洗液推薦使用 pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或無菌生理鹽水 。
儀器檢查?：確認(rèn)真空泵、集菌儀或過濾支架連接完好，管路密封無泄漏，負(fù)壓可調(diào) 。
二、標(biāo)準(zhǔn)操作步驟
步驟1：潤膜與加樣
用少量沖洗液預(yù)先濕潤濾膜，啟動負(fù)壓抽濾排除氣泡，確保濾膜貼合均勻 。
將混勻的待測樣品（如藥品溶液、水質(zhì)樣本）注入濾杯，常見體積為 ?1–10mL（小體積樣品）或高達(dá)200mL（低菌樣品富集）? 。
啟動真空泵，調(diào)節(jié)適中負(fù)壓，使液體穿過濾膜，微生物被截留在濾膜表面。
步驟2：沖洗中和（關(guān)鍵步驟）
特別針對含防腐劑、抗生素等抑菌成分的樣品，必須進(jìn)行沖洗以去除殘留抑制物：
每次加入 ?40–100mL 沖洗液?，抽干后重復(fù) ?2–3 次?，總沖洗量可達(dá)1000mL 。
若沖洗不充分，可能導(dǎo)致菌落無法生長，出現(xiàn)假陰性結(jié)果 。
步驟3：濾膜轉(zhuǎn)移與培養(yǎng)
用無菌鑷子小心取出濾膜，?菌面朝上?平貼于已準(zhǔn)備好的固體培養(yǎng)基平板（如營養(yǎng)瓊脂、R2A瓊脂），避免產(chǎn)生氣泡影響菌落生長 。
培養(yǎng)條件根據(jù)檢測目標(biāo)設(shè)定：
細(xì)菌?：30–35℃ 培養(yǎng) 48–72小時；
霉菌/酵母菌?：23–28℃ 培養(yǎng) 5–7天 。
或采用封閉式集菌培養(yǎng)器，直接向腔室內(nèi)注入液體培養(yǎng)基后密封培養(yǎng) 。
步驟4：結(jié)果觀察與計數(shù)
使用菌落計數(shù)器統(tǒng)計菌落數(shù)量，報告單位為 ?CFU/mL?。
若無菌落生長，則報告“<1 CFU/mL" 。
設(shè)置陽性對照（接種標(biāo)準(zhǔn)菌株）和陰性對照（僅沖洗液）以驗證方法有效性 。

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三、不同樣品處理建議
表格
樣品類型 預(yù)處理方式 沖洗要求
水性液體 直接過濾 簡單沖洗1–2次
膏霜/藥膏 用緩沖液加熱溶解、稀釋 加強沖洗
含酒精/防腐劑 充分混勻 增加沖洗次數(shù)至3次以上
低菌樣品 加大過濾體積（如100–200mL） 標(biāo)準(zhǔn)沖洗
四、關(guān)鍵注意事項與禁忌

? ?濾膜放反?：毛面應(yīng)貼支撐網(wǎng)，光面朝上，否則微生物易漏失 。
? ?未沖洗直接培養(yǎng)?：抑菌物質(zhì)殘留將導(dǎo)致假陰性。
? ?負(fù)壓過大?：可能抽破濾膜，影響截留效果。
? ?操作不無菌?：環(huán)境或工具污染會導(dǎo)致結(jié)果偏高。
? ?過濾強酸、強堿、強氧化劑?：會損壞濾膜和設(shè)備 。

提示：儀器長期未使用時，再次啟用前需用乙醇或次氯酸溶液對管路進(jìn)行消毒處理 。

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